產(chǎn)品可以開票，另有1000u的規(guī)格，~現(xiàn)貨~

Pfu DNA Polymerase

規(guī)格：500U

濃度：5U/ul

保存：-20℃保存, 有效期至少一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Pfu DNA Ploymerase 是從克隆有Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大腸桿菌中表達(dá)并經(jīng)過柱純化

分離出來的重組蛋白，其分子量為90kD。由于Pfu 酶具有3’→5’核酸外切酶活性，它能糾正DNA 擴(kuò)增過程中

產(chǎn)生的錯(cuò)配，而傳統(tǒng)的Taq 酶卻不能，其它耐熱DNA Polymerase 如Vent、Deep Vent、Tli、UITma 等雖具有校

正功能，但Pfu 酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐熱DNA Polymerase 中出錯(cuò)率zui低的。Pfu 酶無5’→3’核酸外切酶活性，

PCR 反應(yīng)中的延伸速度一般為0.5-1kb/min，比Taq酶要低。Pfu 酶比Taq酶熱穩(wěn)定性更好，95℃ 1小時(shí)仍保持

90%以上的活性，對(duì)于GC 含量很高的模板，變性溫度可以提高到98℃而不影響其活性。Pfu 酶的PCR 產(chǎn)物為

平末端，可加A 處理再與T-載體連接或使用平末端克隆載體。

活性定義：

1 單位(U) Pfu DNA Polymerase 活力定義為在74℃，30 分鐘內(nèi)，以活性化的大馬哈魚精子DNA 作為模板/

引物，將10 nmol 脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。

質(zhì)量控制：

SDS-PAGE 檢測(cè)Pfu DNA Polymerase 純度大于99%；經(jīng)檢測(cè)無外源核酸酶活性；PCR 方法檢測(cè)無宿主殘余

DNA；能有效地?cái)U(kuò)增人類基因組中的單拷貝基因；室溫存放一周，無明顯活性改變。

酶貯存緩沖液：

50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol；其他成份。

適?9?2范圍：

用于DNA 的高保真擴(kuò)增，如基因表達(dá)克隆、基因定點(diǎn)突變、細(xì)胞內(nèi)基因點(diǎn)突變的分析（SNP）和末端補(bǔ)平

等。

建議PCR 體系（以50μl 反應(yīng)體系為例）

Template <0.5μg

上游引物（10μM） 1μl

下游引物（10μM） 1μl

10×Buffer（含Mg2+） 5μl

dNTP（各2.5mM） 4μl

Pfu DNA Polymerase 0.5-1μl

ddH2O up to 50μl

注意事項(xiàng)：

1、PCR 反應(yīng)體系加樣時(shí)，zui后一步加入Pfu DNA Ploymerase，整個(gè)過程宜在冰上操作。

Solarbio

Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd

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2、取Pfu DNA Ploymerase 做PCR 反應(yīng)時(shí)，請(qǐng)用高壓滅菌處理過的吸頭。

3、10×Pfu Buffer 中含20 mM Mg2+，如PCR 反應(yīng)需要較高M(jìn)g2+濃度，請(qǐng)另行加入。

4、 用Pfu 酶擴(kuò)增時(shí)，引物的純度要求較高，引物長(zhǎng)度大于18 個(gè)堿基，Tm值在55-80℃之間，引物濃度在0.1-0.5uM

之間，比Taq 酶略高。

相關(guān)產(chǎn)品：

2×Pfu PCR MasterMix (含染料）

dNTPs Mix(10mM each)

10×DNA 上樣緩沖液

50×TAE 緩沖液

GoldView II 型核酸染色劑(5000×)

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